AmpFlSTR® Identifiler® Plus PCR扩增试剂盒

概述

法医DNA案件分析实验室常常遇到一定比例的富有挑战性的样品，很难成功检测。而且，近年来送检进行DNA分析的样品大大扩展，覆盖更广的案件类型，包括侵财案件和轻微犯罪案件。因此，现在法医实验室必须处理更多的样品，而这些样品往往被一种或多种复杂因素所困扰（例如微量DNA、降解、新的或不熟悉的PCR抑制剂、以上两个或更多的因素）。所有这些颇具挑战性的情况会显著影响分析人员获得可信DNA图谱的能力。许多实验室为了从困难样品中获得更好的结果，尽量优化他们的工作流程。这些优化的方法包括对样品进行稀释或纯化，在反应中加更多的酶，或者进行毛细管电泳条件的优化。成熟的磁珠提取方法的出现，比如PrepFiler™法医DNA提取试剂盒，帮助提高了从法医检材中提取的DNA数量和质量，从而提高了下游结果的质量。尽管已经获得了显著进步，但实验室还是需要更多的工具，来应对不断扩张的复杂DNA样本。AmpFlSTR® Identifiler® Plus PCR扩增试剂盒是特地为满足法医分析实验室的需要而开发的。Identifiler® Plus试剂盒采用与广泛使用的Identifiler®试剂盒相同的引物，利用新一代PCR扩增技术来获得全新水平的性能、数据质量和效率。这帮助法医分析人员更有信心地从富有挑战性的样品中得到更多信息。

提高对含抑制剂样本的分析性能I d e n t i f i l e r ® P l u s 试剂盒对近期AmpFlSTR® 试剂盒（如MiniFiler™试剂盒）开发时所定的缓冲液配方进行了改进，目的是克服高水平的PCR抑制，并确保更稳定更高效的扩增。新的配方能从目前Identifiler®试剂盒无法分析的样本中获得结果（图1）。灵敏度更高Identifiler® Plus试剂盒中的缓冲液和预混合液的改良可促进更稳定的扩增 —— 即使是那些不含PCR抑制剂的样品也一样。在无需增加PCR循环数或进样次数的情况下，经过Identifiler® Plus试剂盒扩增的纯化样品所产生的峰高比用目前的Identifiler®试剂盒提高了40-100%（图2）。此外，两种不同循环数的步骤（28和29）的验证让实验室可以调整适应常规DNA模板量样本和微量DNA样本。改善对混合物的分析性能Identifiler® Plus试剂盒的性能改善大大简化了对混合物案件样品的分析 —— 这些混合物中常含有PCR抑制剂，其中次要成分可能以极低的水平存在。Identifiler® Plus试剂盒具有更高的灵敏度，更好的克服PCR抑制的能力，同时杂合子的峰高均衡性和荧光颜色之间的平衡性也更好，使得分析人员能够比以往更轻松更可靠地分析和解释混合物样本（图3）。更干净的基线Applied Biosystems对引物生产工艺进行了重大改进，并将这些改进融入Identifiler®Plus试剂盒中。这些改进生产出更纯的引物，减少染料峰的产生，从而有助于得到更干净的基线。这个特征让分析人员能够用最大的自信和效率来阐释结果，包括那些从困难混合物中获得的结果。其它改进和优势试剂盒配方的改进还实现了更快速的扩增 —— 与目前的Identifiler®试剂盒相比，扩增步骤大约可节省1个小时。此外，Identifiler® Plus预混合液中含有AmpliTaqGold® DNA聚合酶，从试剂盒包装上节省了2支试剂管和一个多余的包装小盒，简化了反应制备。Identifiler® Plus试剂盒中所包含的配方改进，均不需要对原Identifiler®试剂盒的等位基因ladder或5种染料配置进行修改。这种配置可实现最佳的基因座间隔，且扩增子的大小范围不超过360 bp，与其他扩增子大小范围明显大得多的多重分析系统相比，能够从降解的样品中更好地获得数据。对于严重降解的样品，可采用专门设计的MiniFiler™试剂盒与Identifiler®Plus试剂盒联合使用，利用miniSTR技术来帮助得到更多信息。此外，Identifiler® Plus试剂盒维持了原引物序列，确保与过去用Identifiler®、Identifiler® Direct、Profiler Plus®、Cofiler®或SGM Plus®试剂盒分型的样品保持基因分型一致性，并保证了与现有DNA数据库

进行比对。